细胞培养箱微生物污染源分析及消毒灭菌控制方案

　　细胞培养箱是一种常用的实验设备，在使用过程中是以一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞的一个过程，整个过程对培养环境的要求极其严苛，为避免被微生物污染，细胞培养箱的的清洁与消毒是必不可少的。然而，针对培养过程中面临的各种污染源，各细胞培养箱微生物的控制方式和效果不尽相同，对于细胞来说，非常理想的培养环境同样也适合这些污染物的生存，培养箱本身是不会辨别的，而细胞培养中大部分时间里细胞都是位于培养箱内，因此箱体内能否抑菌或灭菌非常关键!

　　细胞培养箱的污染源

　　凡是混入细胞培养箱(细胞培养环境)中，对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染。细胞持续在污染环境中生长时，轻者细胞生长缓慢，细胞分化变形，较重的细胞增殖停止，从瓶壁脱落，甚至死亡。不同的污染物对细胞的影响也有差别，有的影响是长期、缓慢和潜在的，而有的则能在很短的时间内抑制细胞生长或产生有毒物质杀害细胞。根据污染源不同主要可以分为：生物性污染、化学性污染、物理性污染和气溶胶污染。

　　1、生物性污染：

　　这是最常见也是危害最大的污染。如细菌、真菌(霉菌和酵母菌)、病毒、支原体、非同种细胞等。这些污染源有可能是人为带入，或是细胞在放入培养箱前已经受污染，再或者是箱体本身没有消毒干净。体外培养的细胞自身没有抵抗污染的能力，而培养基中所加抗生素的抗微生物污染的能力也是有限的，因而细胞微生物污染一旦发生往往是无法挽救的。

　　1)支原体：支原体污染后，因为它们不会使细胞死亡可以与细胞长期共存，培养基一般不发生浑浊，细胞无明显变化，外观上给人以正常感觉，实则细胞已经受到多方面潜在影响，如引起细胞变形，影响DNA合成，抑制细胞生长等，往往被大多数实验者忽视。

　　2)细菌：细菌污染后，培养基1-2天就会变色，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显，应迅速将污染细胞与其它细胞系隔离，灭菌后丢弃，还要用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台。

　　3)病毒：由于病毒寄生生存，爆发后尽快和正常细胞隔离，丢弃处理，相对来说容易处理，对操作者威胁较大;尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。

　　4)真菌(霉菌和酵母菌)：真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了;目前传统的灭菌方式很难将其杀灭，包括现在常用的两性霉素，一旦污染容易反复爆发，尤其孢子很难杀灭。

　　5)非同种细胞：即细胞交叉污染，由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。目前，世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效。

　　2、化学性污染：

　　培养箱中许多化学物质都可以引起细胞污染。如细胞培养容器清洗过程中残留的洗涤剂、加湿器中未纯化的水、人为带入的液体或气体都可能成为化学性污染的来源。不同化学物质对细胞污染是不一样的，有的可能促进或抑制细胞生长，有的甚至杀死细胞。

　　3、物理性污染：

　　培养环境中的物理因素，如温度、放射线、振动、辐射(紫外线或荧光)会对细胞产生影响。物理性污染常常被人们所忽视或被笼统地归为化学性污染，其主要是在代谢水平或分子水平上，影响细胞正常的生理过程。

　　4、气溶胶污染：

　　气溶胶是液体或固体微粒均匀地悬浮在气体介质中的分散体系，当微粒是微生物时，就是微生物气溶胶，如果这种微生物是病原性的，就是病原微生物气溶胶。细菌、病毒等病原体通过气溶胶可在人与人、人与环境之间传播。微生物气溶胶可分为两大类：一类是飞沫核气溶胶，另一类是粉尘气溶胶。医学实验室内许多操作都可以产生气溶胶，并且大多可能是病原微生物形成的感染性气溶胶，由于其气溶胶分子小，漂浮在空气中、粘附于人身上，易在空气中扩散而污染实验室的空气。

　　如何防控细胞培养箱的污染

　　无论新人还是熟手，细胞污染都是必须要面对的，那对于细胞污染，我觉得最好的措施就是预防为主，因为细胞一旦污染，想救是非常困难的，即便救活，细胞状态也会差很多。对于细胞培养箱的微生物控制，消毒和灭菌是整个环节的重中之重。

　　消毒是指杀死微生物的物理或化学手段，但不一定杀死其孢子。灭菌是指杀死所有微生物，当培养箱内细胞受到污染时则需要采取灭菌措施。一般在培养箱内细胞没有污染的情况下平均1-3个月彻底消毒一次。同时对于细胞室内空气也应及时采取消毒措施，因为上述的所说的气溶胶污染就是通过空间环境传播的。可以联合使用液体和气体消毒剂来清除实验室空间、用具和设备的污染。这样才能最大程度的必免微生物的污染。

　　为了确定目前一些常用消毒方式(液体消毒剂、紫外和加热)对细胞培养箱各种微生物(包括芽孢)杀灭能力,选出既经济、有效且腐蚀性小,安全的常用消毒剂, 作者通过对微生物及其芽孢灭活具有潜在应用价值的资料进行调查,总结出消毒剂应具备的特性：

　　1、需要具有广谱高效的杀菌效果，一种消毒产品就能杀灭细菌、真菌、霉菌等病原微生物，并且完全生物可分解，对人无害，无腐蚀性，无残留。

　　2、不产生细菌耐药性，以符合长期重复使用的要求;

　　3、要求是食品级消毒剂，达到无害的等级;

　　4、要求在行业中有成熟的应用;