睿信生物 鸡禽流感H9亚型抗体ELISA试剂盒定性

公司介绍     

     生物药物分析方法开发   分析方法验证      高品质科研elisa试剂盒、化学发光试剂盒开发与定制供科研使用，不得用于临床检验。

   

工作原理

鸡禽流感H9亚型抗体ELISA试剂盒（定性）本研究采用高致病性禽流感病毒(Highlypathogenicavianinfluenzavirus，HPAIV)A/FPV/Rostock/34(H7N1)(FPV)毒株作为免疫原，免疫8周龄BALB/C雌性小鼠，三次加强免疫后取脾细胞与SP2/0细胞融合，用血凝抑制试验(HI)方法检测筛选，阳性细胞克隆经有限稀释法克隆培养，最后获得两株H7亚型HA特异性单抗6H4和7F6，亚类分别为IgG2a、IgG2b，轻链都为k链，经检测具有良好的特异性。采用纯化的HPAIVA/FPV/Rostock/34(H7N1)(FPV)毒株作为免疫原，灭活后加入弗氏完全佐剂和不完全佐剂制成疫苗多次免疫山羊，获得抗H7亚型禽流感的高免羊血清。 用羊血清作为捕获抗...

标本要求

鸡禽流感H9亚型抗体ELISA试剂盒（定性）以辣根过氧化物酶标记的沙门氏菌O9单抗3—47—0与包被的鸡白痢沙门氏菌脂多糖抗原建立了一种抗体阻断ELISA以检测鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌感染。该方法基于待检血清样品抑制酶标单抗与脂多糖的结合，以检测鸡白痢和鸡伤寒特异性抗体。对72份已知鸡白痢阳性血清（抑制率为（98．5±4．0）％）、54份已知鸡白痢阴性血清（抑制率为（15．3±8．0）％）、42份SPF鸡血清（抑制率为（0．8±7．2）％）检测的结果表明，该方法具有很强的区分能力。在人工感染试验中，从第2周开始，该方法能从全部鸡只中检测到特异性抗体，比全血玻板凝集试验（PAT）早1周时间。对344份种鸡血清的检测结果表明。单抗阻断ELISA比PAT特异性好、敏感性高。另外，该方法也能检测出与鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌有共同抗原的沙门氏菌感染产生的抗体。

 

 

满足标准

       鸡禽流感H9亚型抗体ELISA试剂盒（定性）应用商品化酶联免疫吸附试验 (BLISA)试剂盒和血凝抑制试验(HI)法,同时测定了173个常规鸡产蛋下降综合症(EDS_(76))抗体送检样品.结果显示,ELISA 法的灵敏度和特异性分别为 HI 法的93.9%和100%.每一样品用这二种方法在相互独立的条件下,检测取得了基本相同的结果,Kappa 值达到了0.97,表明了这二种方法有很好的一致性。二种方法抗体效价的相关性分析表明,相关系数为0.77.在对带有高、中、低抗体和阴性混合血清的重 复测定中,发现随着 S/P 值的变小,其标准差也随之减小,显示了较好的重复性.本试验还对阴阳性判别的临界点的设定对试验灵敏度的影响进行了分析。

常见问题

产品特点

鸡禽流感H9亚型抗体ELISA试剂盒（定性）为建立敏感、特异、稳定的传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法,本试验以杆状病毒表达系统表达的重组IBDV-VP2结构蛋白为抗原,通过包被VP2单克隆抗体捕捉VP2结构蛋白的形式,建立鸡血清VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法（VP2-ELISA）。条件优化结果显示：单克隆抗体最适包被质量浓度为3mg/L,VP2最佳稀释度为1∶20,夹心ELISA效价1∶12.8,被捡血清的稀释度为1∶400。该方法与禽流感、鸡新城疫、鸡马立克氏病、鸡传染性喉气管炎病毒及杆状病毒阳性血清无交叉反应,对琼扩效价为1∶32的IBDV阳性血清的最低检出量为1∶12 800,ROC曲线确定的D450nm临界值为0.236,组内、组间重复性试验变异系数均小于10%。用本试验建立的VP2-ELISA方法与进口IBDV-ELISA抗体试剂盒平行检测100份背景已知的临床鸡血清样品,总符合率VP2-ELISA（97%）高于进口ELISA试剂盒（96%）。本试验为进一步研制鸡传染性法氏囊病病毒VP2结构蛋白抗体ELISA检测试剂盒奠定基础。

产品功能

鸡禽流感H9亚型抗体ELISA试剂盒（定性）禽流感(AI)是由A型流感病毒所引起的禽类(家禽和野禽)的感染和/或疾病综合征.禽流感病毒(AIV)的宿主谱很广,水禽类常可表现为显性感染,或为隐性感染而成为重要的传染源.不同亚型的AIV对家禽的致病性不同,H9亚型禽流感病毒主要引起肉鸡呼吸道症状和蛋鸡产蛋下降.目前禽流感的确诊方法通常为用病料接种鸡胚进行病毒分离,以血凝和血凝抑制试验来鉴定病毒、最终确定其血清亚型.这种方法花费大,耗时长.已建立的方法有琼脂扩散试验(AGP)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光技术(IFA)、核酸探针及聚合酶链反应(PCR)等.但上述方法由于核心试剂的限制均不能快速、准确地进行诊断.而应用分型单抗进行ELISA检测从理论上来讲可以解决上述矛盾.因此,我们拟应用杂交瘤技术制备AIV分型单抗并建立快速检测病原体的方法.

条件技术

鸡禽流感H9亚型抗体ELISA试剂盒（定性）采用加蔗糖垫离心纯化鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制备抗原,用提纯的IBV抗原包被微量板,建立了检测鸡传染性支气管炎(IB)抗体的ELISA试剂盒.抗原、被检血清和酶标结合物的最佳工作浓度分别为10ug/ml、1∶200和1∶3200.与IDEXX试剂盒相比,其敏感性、重复性、特异性均接近国外同类产品水平.对SPF鸡血清、实验免疫与攻毒的SPF鸡血清进行检测,结果表明所建立的ELISA特异性为95.6%,与IDEXX试剂盒符合率为95.6%.用于检测抗IBV特异性IgG抗体发现在免疫接种IB弱毒苗后,第4天即可检测到IgG抗体,峰值在第3周.试验鸡在通过滴鼻、点眼途径人工感染IBV强毒后,第5天抗体滴度明显上升.我们认为,该法是目前我国SPF鸡质量监测、养鸡生产中进行IB监测较好的方法.

测试报告

鸡禽流感H9亚型抗体ELISA试剂盒（定性）在单抗夹心ＥＬＩＳＡ和单抗ＰＥＧ—ＥＬＩＳＡ的基础上首次建立了快速诊断新城疫（ＮＤ）的单抗ＥＬＩＳＡ试剂盒。以０．５～２μｇ／ｍｌ的Ｍ２２单抗包板，在选择的最佳工作条件下，对提纯的新城疾病毒（ＮＤＶ）的最小检出量为２．５～５ｎｇ／ｍｌ病毒蛋白；ＮＤＶ阳性血清对本试剂盒有特异性阻断作用，与鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）、鸡痘病毒（ＦＰＶ）、减蛋综合征病毒（ＥＤＳ—７６）、鸡马立克氏病病毒（ＭＤＶ）、大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、沙门氏菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）交叉反应的阴性结果及双盲考核试验的结果均表明它对ＮＤＶ具有特异性；试剂盒批内与批间重复试验变异系数小于６％；酶标抗体冻干前后活性未发生变化，以２０％的脱脂乳为冻干保护剂冻干后工作浓度与物理性状最佳；包被单抗后的酶标板经吸干、密封后，在４℃可保存６个月，－２０℃保存一年以上稳定性未发生变化；冻干后的酶标抗体在４℃可保存３００天以上，０℃以下１年活性未见下降；试剂盒在４℃可保存６个月，０℃以下保存１年。用该试剂盒检测从疑有ＮＤＶ强毒感染的鸡群中采集泄殖腔棉林样品３０２４份，共检出阳性１２４０份；从临床有典型ＮＤ病变的鸡群中采集样。

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