睿信生物 人天青杀素/肝素结合蛋白(AZU/HBP) ELISA试剂盒

公司介绍     

     生物药物分析方法开发   分析方法验证      高品质科研elisa试剂盒、化学发光试剂盒开发与定制供科研使用，不得用于临床检验。

产品简介

人天青杀素/肝素结合蛋白(AZU/HBP) ELISA试剂盒目的评价我国蓝十字生物药业（北京）有限公司生产的登革热病毒NS1抗原检测试剂盒的性能。方法分别用蓝十字NS1试剂盒和美国NS1试剂盒对已知登革热NS1阳性和阴性者血清进行检测,比较两种方法的灵敏度和特异性,并进行配对资料的χ2检验分析。结果两种试剂盒检测120份已知阳性血清均为阳性,阳性符合率均为100%。蓝十字NS1试剂检测已知阴性血清233份,232份阴性,阴性符合率为99.57%;美国NS1试剂盒检测已知阴性血清104份,均为阴性,阴性符合率为100%。两种试剂盒检测干扰血清标本18份,其中蓝十字NS1试剂检测16份阴性,2份溶血标本阳性,干扰标本符合率为88.89%;美国NS1试剂盒检测结果均为阴性,干扰标本符合率为100%。两种试剂盒检测结果差异无统计学意义（χ2=1.33,P〉0.05）。两批号蓝十字NS1试剂盒检测已知阳性和阴性标本结果差异无统计学意义（P〉0.05）。结论蓝十字NS1试剂盒和WHO推荐的美国NS1试剂盒性能相当,均具有灵敏度好、特异性高的特点。蓝十字NS1试剂盒对已知阳性和阴性标本检测的批间稳定性好。

产品用途

 人天青杀素/肝素结合蛋白(AZU/HBP) ELISA试剂盒目的比较4种国产HBsAg ELISA试剂盒的检测性能。方法应用Roche Modular E170全自动电化学发光免疫分析仪检测余留的两对半模式全阴性的标本对相关样品进行稀释,然后选取4种应用广泛的国产HBsAg ELISA试剂盒进行检测,评价4种试剂的精密度、Cut-off点对应的浓度范围、特异性、检测范围、"Hook"效应和抗干扰能力。结果4种试剂盒弱反应性标本检测的批内精密度分别为6.21%、13.04%、9.45%、10.49%;批间精密度分别为15.76%、23.89%、19.12%、24.22%。4种试剂Cut-off点的对应浓度在0.3～0.5 ng/ml之间。4种试剂盒的特异性有一定差异,分别为93.33%、93.33%、80.12%、91.32%。HBsAg浓度与吸光度的比值呈S型曲线关系。高浓度标本对4种试剂均造成不同程度的"Hook"效应。4种试剂盒的抗溶血干扰能力较差,抗脂血和黄疸干扰能力较强。结论不同厂商HBsAg ELISA试剂盒的检测性能有差异,国产HBsAg ELISA试剂尚应努力改进和提高。

满足标准

 人天青杀素/肝素结合蛋白(AZU/HBP) ELISA试剂盒口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的高度接触性传染病,主要侵害偶蹄动物产生急性高热等症状。该病感染能力强,传播途径多,在多个国家和地区发生过大流行,严重阻碍了畜牧业发展。口蹄疫病毒有7个血清型,分别为O、A、C、Asia 1、SAT 1-3型,每个血清型又包含多个亚型,各型之间不存在交叉反应。我国的主要流行血清型为A型、O型和Asia 1型。2009至2013年间,在我国上海、湖北、武汉、新疆阿克苏地区以及周边国家多次爆发A型口蹄疫疫情,给当地经济带来了巨大的损失。为建立一种有效检测A型FMD的方法,首先需获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白。经过PCR扩增得到A型FMDVvp1基因片段,与原核表达载体pET-28a连接,构建重组质粒pET-A-vp1。经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21(DE3)菌后,SDS-PAGE及Western-Blot分析表明,A-VP1重组蛋白分子质量约为29 ku,能够被A型口蹄疫阳性血清特异性识别,蛋白表达正确。超声破碎后发现A-VP1蛋白以包涵体形式存在。通过对表达条件进行优化,发现在37℃条件下,OD600为0.6,IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导表达6 h后,A-VP1蛋白的表达量。ELISA检测结果显示A-VP1包涵体蛋白经过洗涤纯化,尿素浓度梯度透析复性后活性较高。A型FMDVVP1活性蛋白的成功表达为进一步研制口蹄疫基因工程疫苗和诊断试剂盒奠定了基础。以原核表达经纯化复性制备的A型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白代替传统病毒抗原包被,建立快速、安全、有效的A型FMDV抗体ELISA检测试剂盒。对前期制备的A-VP1蛋白进行Westem-Blot检测,结果表明,A-VP1蛋白能够特异性识别A型FMDV阳性牛血清,可作为检测抗原建立检测A型FMDV抗体检测的方法。以质量浓度1 mg/LA-VP1蛋白为检测抗原,方阵滴定法确定检测血清稀释度为1:100,的酶标二抗稀释度为1:2 000,建立A型FMDV抗体ELISA检测方法。该方法的敏感性为94.32%,特异性为99.09%,批内与批间重复试验变异系数均小于10%。采用该方法检测201份临床血清,与液相阻断ELISA试剂盒的符合率达92.54%。以此为基础组装A型口蹄疫病毒VP1蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒,该试剂盒特异、敏感、稳定、操作简便,可用来监控A型口蹄疫抗体水平。

产品功能

         人天青杀素/肝素结合蛋白(AZU/HBP) ELISA试剂盒根据国内流行的Asia 1型口蹄疫病毒的基因组特性,合成了Asia 1型口蹄疫病毒2个流行毒株VP1基因的5个抗原表位,并将其克隆到pMDl8-T载体上,再按设计的酶切位点连接,构建出Asia 1型口蹄疫病毒VP1双拷贝基因片段(VPlAsia).然后,将VP1Asia基因连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建了重组表达质粒pET-28a-VPlAsia,接着将其转入BL21茵中进行原核表达.以纯化的表达蛋白作为抗原检测了牛Asia 1型口蹄疫病毒阳性血清.结果显示,VPIAsia基因在大肠杆菌中获得了高效表达,以纯化的VPIAsia蛋白作为抗原建立了检测Asia 1型口蹄疫病毒抗体的ELISA方法.以建立的ELISA方法和标准Asia 1型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒对30份临床样品进行了检测,两种检测方法的阳性率分别为90.0% (27/30)和93.3%(28/30),符合率为89.7%(26/29).本研究为组装Asia 1型口蹄疫病毒抗体ELISA诊断试剂盒奠定了基础.

品质保证

         人天青杀素/肝素结合蛋白(AZU/HBP) ELISA试剂盒布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella)侵入机体引起的人畜共患传染病,感染动物主要表现为流产和不孕不育等症状。近年来,布鲁氏菌病在我国部分地区仍然对当地的畜牧业和人类健康造成较大的危害,及时做出快速准确的诊断是防治和根除该病的关键。目前,我国在布鲁氏菌病防控工作中主要采用虎红平板凝集试验、试管凝集试验、补体结合试验等传统血清学方法进行检测,因此有必要建立一种高通量的、快速准确的检测布鲁氏菌抗体的ELISA方法。本研究通过原核表达系统表达了布鲁氏菌的BP26、 OMP16、CP39、SP41和eryC这5个特异性蛋白,并对其作为检测用抗原的可行性进行了研究,最终选定重组周质蛋白BP26作为包被抗原,初步建立了检测牛布鲁氏菌病血清抗体的间接ELISA方法。 一、布鲁氏菌BP26、OMP16、CP39、SP41和eryC基因的原核表达 根据羊种布鲁氏菌M5(B.melitensis M5)的BP26、OMP16、CP39、SP41和eryC基因序列设计引物,用PCR方法扩增目的片段,大小分别为868bp、556bp、732bp、1329bp和985bp,然后把目的片段分别连接到克隆载体pMD18-T,测序确认后再连接到表达载体pET-28a(+)。将酶切鉴定正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,得到重组蛋白,大小分别约为32kDa、21kDa、30kDa、51kDa和38kDa,且均为包涵体表达。优化的表达条件为：37℃下,220rpm摇振培养,IPTG终浓度1mM,诱导5h。 用His亲和层析法对BP26、OMP16、CP39、SP41和eryC这5种重组蛋白进行纯化,收获的纯化产物浓度分别为1.0mg/mL、2.4mg/mL、3.5mg/mL、1.3mg/mL、1.7mg/mL。用Western blotting试验鉴定5种重组蛋白的免疫反应性,结果表明5种重组蛋白均能与牛布鲁氏菌病阳性血清发生特异性反应,只是反应的强度有所不同,其中以重组蛋白BP26反应信号。

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