AAT Bioquest 品牌 Buccutite RPE抗体标记试剂盒 标记100ug抗体 货号1310

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陕西省西安市

  • 图文详情
  • 产品属性
  • Buccutite RPE抗体标记试剂盒 标记100ug抗体

    货号                     1310存储条件                r/l
    规格2 Labelings                               
    Ex (nm)564Em (nm)574
    分子量溶剂
    产品详细介绍

    简要概述

            Buccutite RPE 抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。RPE是具有565nm额定的激发波长和575nm的发射波长的橙色荧光蛋白。 ReadiLink RPE共轭试剂盒提供了一种简单方便的方法,灵活运用于你的抗体与视网膜色素上皮。共轭抗体可以在WB,ELISA和免疫组织化学应用中使用。本试剂盒足够用于2个标记反应,每次50微克抗体。考虑PE(240 kDa)的大尺寸,抗体在标记反应中使用的量必须总是小于RPE的量。对于任何新的抗体试剂的比例,必须通过实验来确定,。 60微克抗体约对应于一个抗体:1:1 RPE的摩尔比。Buccutite RPE抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。

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    产品说明书

    实验方案

    操作步骤

    1.运行Antibody-Buccutite MTA反应

    1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA(组分B)的小瓶中,并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

    1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意:如果需要,抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。

    2.准备旋转柱用于抗体-Buccutite MTA纯化

    2.1将提供的旋转柱(组分D)反转几次以重新悬浮沉降的凝胶并除去任何气泡。

    2.2取下并将色谱柱放入洗涤管(2 mL,未提供)中。取下盖子,让多余的填料缓冲液通过重力排放到凝胶床的顶部。如果色谱柱没有开始流动,请将盖子推回色谱柱并再次将其取出以开始流动。丢弃排出的缓冲液,然后将色谱柱放回洗涤管中。但是,如果将色谱柱放入12 x 75 mm试管(未提供)中,请立即离心。

    2.3在摇动式离心机中以1,000×g离心2分钟(参见“离心注意事项”部分)以除去包装缓冲液。丢弃缓冲液。

    2.4向柱中加入1-2 mL 1X PBS(pH 7.2-7.4)。每次施用PBS后,让缓冲液通过重力排出,或将柱离心2分钟以除去缓冲液。丢弃收集管中的缓冲液。重复此过程3-4次。

    2.5在摇动式离心机中以1,000×g离心2分钟(参见“离心注意事项”部分)以除去包装缓冲液。丢弃缓冲液。

    3.纯化抗体-Buccutite MTA溶液

    3.1将柱(来自步骤准备旋转柱用于抗体-Buccutite MTA纯化)置于干净的收集管(1.5mL,未提供)中。 小心地将样品(~105μL,来自Step Antibody-Buccutite MTA反应)直接加载到色谱柱中心。

    3.2加载样品后,加入5μL1XPBS(pH 7.2-7.4),使总体积为110μL。 将柱以1,000xg离心5-6分钟,并收集含有所需抗体-Buccutite MTA溶液的溶液。

    4.制备抗体-PE缀合物

    4.1通过向Buccutite FOL活化的PE(组分A)的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液,通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

    4.2将整瓶Buccutite FOL活化的PE溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液(来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液)中,充分混合并在室温下旋转混合物1小时。

    4.3抗体-PE结合物现在可以使用了。 注意:立即使用时,抗体-PE结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意:对于长期储存,需要浓缩或冷冻干燥抗体-PE结合物溶液。

    5.抗体-PE共轭物的储存

    抗体缀合物应在载体抗体(例如0.1%牛血清白蛋白)存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时,抗体-PE缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存,可以将抗体-PE缀合物冻干并在≤-20℃下储存。

    6.离心注意事项

    6.1旋转柱(组分D)可以装入2mL微量离心管或12×75mm试管中,用于在离心过程中收集样品。 使用2 mL微管和色谱柱进行初始色谱柱平衡步骤。

    6.2能够产生1,000 x g的力的摆动式离心机适用于Bio-Spin柱。 在特定转速下产生的重力是微量离心机转子半径的函数。 有关从每分钟转数(RPM)到离心力或g力的转换信息,请参阅摆动式离心机说明手册。 或者,使用以下等式计算达到1,000 x g重力所需的RPM速度。

    6.3RCF(xg)=(1.12 x 10-5)×(RPM)×2×r(RCF是相对离心力,r是从转子中心到Bio-Spin柱中间测量的以厘米为单位的半径 ,RPM是转子的速度)。

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    级别 : 超纯、高纯
    含量 : 95%
    产品规格 : 2Labelings
    品牌 : AAT Bioquest
    用途范围 : 标记抗体的便捷方法
    特色服务 : 顺丰包邮 免费技术咨询
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