睿信生物 小鼠凝血酶原(PT)elisa试剂盒

公司介绍     

     生物药物分析方法开发   分析方法验证      高品质科研elisa试剂盒、化学发光试剂盒开发与定制供科研使用，不得用于临床检验。       

产品用途

           小鼠凝血酶原(PT)elisa试剂盒探讨12-烷基化壳聚糖纳米粒(12-ACSs)包裹的反义内皮素转换酶(ECE)核酸表达质粒对哮喘模型小鼠气道高反应性的影响.方法 将40只小鼠按完全随机设计原则分为4组,每组10只.AS组予OVA致敏激发气道炎症并只给予生理盐水干预组;N组仅维予生理盐水致敏,激发并治 疗;NM组于OVA致敏激发并给予包裹反义ECE核酸的12-ACSs;DNA组以OVA致敏激发并给予裸反义ECE核酸.3组在致敏后于激发前24 小时分别通过气道灌注包裹反义ECE核酸的12-ACSs100 μl、0.9%生理盐水100 μl和反义ECE核酸5 μg加0.9%生理盐水(总量100 μl),N组用等体积0.9%生理盐水处理.末次激发后检测进行支气管肺泡灌洗,计算支气管肺泡灌洗液中细胞总数、分类计数,肺组织病理切片,观察病理变 化.采用整体体积描记法检测小鼠气道反应性,ELISA法检测脾细胞培养上清液白细胞介素(IL)-4、和内皮素1(ET-1)水平.结果 NM组小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数、分类计数明显低于As组和DNA组(均P＜0.01),肺组织的病理损害明显减轻.As、NM、DNA组较N组小鼠 气道气道反应性明显增高,而NM组气道阻力较As及DNA组明显降低.脾细胞培养上清液N组ET与IL-4水平均明显低于其余3组,而NM组ET与IL- 4水平则明显低于As组和DNA组(均P＜0.001).结论 气道内给予包裹反义ECE核酸表达质粒的12-ACSs纳米粒治疗,可以减少ET的合成,从而抑制气道高反应性.   

         

满足标准

    小鼠凝血酶原(PT)elisa试剂盒观察胰岛素转录关键调控基因PDX-1、NeuroD1及MafA转染小鼠间充质干细胞(mBMSCs)和小鼠诱导多能干细胞(iPSCs)后，能否定向分化为胰岛素分泌细胞，探索体外基因转染制备胰岛素分泌细胞用于移植治疗1型糖尿病的可行性。 方法 (1)全基因合成小鼠PDX-1、NeuroD1及MafA基因（以下简称三基因）编码区域序列并测序。将目的基因片段分别与内部核糖体进入位点序列-绿色荧光蛋白（IRES-GFP）进行PCR拼接，得到目的基因与GFP的共表达片断，并将含目的基因序列的质粒重组到腺病毒载体上。分别将含目的基因PDX-1、NeuroD1及MafA的腺病毒载体转染293A细胞，制备重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-GFP、Ad–mNeuroD-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP，通过免疫法检测腺病毒液滴度。 (2)体外分离培养及鉴定mBMSCs；小鼠Oct4、Sox2、Klf4及cMyc经Tet-On慢病毒系统转导小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs），挑选并扩增克隆。通过形态学鉴定，干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1检测，体内外三胚层分化等实验筛选鉴定iPSCs。 (3)重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-GFP、 Ad–mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP体外联合转染mBMSCs及小鼠iPSCs。转染获得的细胞分别用RT-PCR检测胰岛β细胞功能基因的表达；免疫荧光检测胰岛素蛋白的表达及定位；ELISA检测不同浓度葡萄糖刺激下胰岛素的分泌量。 (4)三基因转染的mBMSCs及小鼠iPSCs定向分化为胰岛素分泌细胞后，移植到糖尿病小鼠模型，免疫组化检测其在肝内胰岛素的表达；空腹血糖监测检测移植细胞在糖尿病小鼠体内的功能发挥。 结果 (1)重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-GFP、 Ad-mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP经Pac I单酶切后凝胶电泳显示会形成约2,000bp的小条带及腺病毒载体将近35,000bp的大条带，与预期及测序结果一致，表明含三基因的同源重组腺病毒载体构建正确。 (2) LV-ef1a-Hygromicin-TRE-Oct4/Sox2/Klf4/cMyc转染MEFs后，成功获取iPSCs，能形成边缘光整的致密克隆；表达干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1；在体内外能分化为三胚层组织。 (3) Ad-mPDX-1-IRES-GFP、Ad–mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP体外联合转染的mBMSCs及小鼠iPSCs能分化为胰岛素分泌细胞，RT-PCR结果显示其胰岛β细胞功能基因的表达与小鼠胰岛β细胞株MIN6类似；免疫荧光检测见细胞胞浆内有胰岛素合成；ELISA检测结果显示细胞对不同浓度的葡萄糖有较好的反应性。 (4)免疫组化镜检发现移植细胞注射区域的肝实质内可见相对集中的棕黄色细胞，表明移植细胞胞浆内表达胰岛素蛋白；空腹血糖监测显示移植细胞能够控制糖尿病小鼠的高血糖，在体内发挥良好的治疗作用。 结论 (1) LV-ef1a-Hygromicin-TRE-Oct4/Sox2/Klf4/cMyc能成功将MEFs重编程为iPS细胞。 (2)胰岛素转录关键调控基因PDX-1、NeuroD1和MafA三者能协同作用，促进mBMSCs及小鼠iPSCs定向分化为具有显著的胰岛素合成和分泌能力的胰岛素分泌细胞。 (3)胰岛素转录关键调控基因修饰的mBMSCs及小鼠iPSCs移植体内能发挥一定的治疗作用，有希望成为胰岛β细胞的替代细胞用于移植治疗1型糖尿病。

产品功能

小鼠凝血酶原(PT)elisa试剂盒检测范围： 96T50U/L - 1200U/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中蛋白酪氨酸磷酸酶(IA-2)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠蛋白酪氨酸磷酸酶(IA-2)水平。用纯化的小鼠蛋白酪氨酸磷酸酶(IA-2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入蛋白酪氨酸磷酸酶(IA-2)，再与HRP 标记的蛋白酪氨酸磷酸酶(IA-2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的蛋白酪氨酸磷酸酶(IA-2)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠蛋白酪氨酸磷酸酶(IA-2)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（2400U/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

产品简介

小鼠凝血酶原(PT)elisa试剂盒操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。1200U/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液600U/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液300U/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液150U/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液75U/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

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