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真空冷冻干机的分类

1 真空冷冻干燥机特点

　　1.冷冻真空干燥过程是无不纯物混入物体，能保持物料的原有成份和活性成份及物料形体不受损。

　　2.利用真空冷冻干燥原理制造，结构紧凑合理，维护便利、费用低廉，全自动控制、操作简便。

　　3.功能周全，无需配套设施（蒸汽锅炉、冷却塔等),通上三相电便可独立工作。

　　4.设计独特，能耗极低。使低价格物料的冻干有利可图。

2 真空冷冻干燥机工作原理 

　　开机后将物料投入物料箱内进行冷冻.物料的冷冻过程.一方面是真空系统进行抽真空把一部分水份带走;另一方面是物料受冻时把某些分子中所含水份排到物料的表面冻结.达到冷冻要求后,由加热系统对物料加热干燥,通过抽真空把物料中所含的水份带到冷冻捕集箱结冻,达到物料冷冻干燥要求.[1]

　　冷冻干燥是指通过升华从冻结的生物产品中去除水分或其他溶剂的过程。升华指的是溶剂，比如水，象干冰一样，不经过液态，从固态直接变为气态的过程。冷冻干燥得到的产物称作冻干物（lyophilizer），该过程称作冻干（lyophilization）。

　　传统的干燥会引起材料皱缩，破坏细胞。在冰冻干燥过程中样品的结构不会被破坏，因为固体成份被在其位置上的坚冰支持着。在冰升华时，它会留下孔隙在干燥的剩余物质里。这样就保留了产品的生物和化学结构及其活性的完整性。

　　在实验室中，冻干有很多不同的用途，它在许多生物化学与制药应用中是不可缺少的。它被用来获得可长时期保存的生物材料，例如微生物培养、酶、血液、与药品，除长期保存的稳定性以外，还保留了其固有的生物活性与结构。为此，冻干被用于准备用做结构研究（例如电镜研究）的组织样品。冷冻干燥也应用于化学分析中，它能得到干燥态的样品，或者浓缩样品以增加分析敏感度。冻干使样品成分稳定，也不需改变化学组成，是理想的分析辅助手段。

　　冷冻干燥可以自然发生。在自然情况下，这一过程缓慢而且不可预测。通过冷冻干燥系统，人们改进、细分了很多步骤，加速了这一过程。

3 基本内容 

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　　干燥是保持物质不致腐败变质的方法之一.干燥的方法许多,如晒干、煮干、烘干、喷雾干燥和真空干燥等.但这些干燥方法都是在0℃以上或更高的温度下进行.干燥所得的产品,一般是体积缩小、质地变硬,有些物质发生了氧化,一些易挥发的成分大部分会损失掉,有些热敏性的物质,如蛋白质、维生素会发生变性.微生物会失去生物活力,干燥后的物质不易在水中溶解等.因此干燥后的产品与干燥前相比在性状上有很大的差别.

　　而冷冻干燥法不同于以上的干燥方法,产品的干燥基本上在0℃以下的温度进行,即在产品冻结的状态下进行,直到后期,为了进一步降低产品的残余水份含量,才让产品升至0℃以上的温度,但一般不超过40℃.

　　冷冻干燥就是把含有大量水分物质,预先进行降温冻结成固体,然后在真空的条件下使水蒸汽直接升华出来,而物质本身剩留在冻结时的冰架中,因此它干燥后体积不变,疏松多孔在升华时要吸收热量.引起产品本身温度的下降而减慢升华速度,为了增加升华速度,缩短干燥时间,必须要对产品进行适当加热.整个干燥是在较低的温度下进行的.

　　冷冻干燥有下列优点:

　　一．冷冻干燥在低温下进行,因此对于许多热敏性的物质特别适用.如蛋白质、微生物之类不会发生变性或失去生物活力.因此在医药上得到广泛地应用.

　　二．在低温下干燥时,物质中的一些挥发性成分损失很小,适合一些化学产品,药品和食品干燥.

　　三．在冷冻干燥过程中,微生物的生长和酶的作用无法进行,因此能保持原来的性装.

　　四．由于在冻结的状态下进行干燥,因此体积几乎不变,保持了原来的结构,不会发生浓缩现象.

　　五．干燥后的物质疏松多孔,呈海绵状,加水后溶解迅速而完全,几乎立即恢复原来的性状.

　　六．由于干燥在真空下进行,氧气极少,因此一些易氧化的物质得到了保护.

　　七．干燥能排除95-99%以上的水份,使干燥后产品能长期保存而不致变质.

　　因此,冷冻干燥目前在医药工业,食品工业,科研和其他部门得到广泛的应用.

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冻干机的组成和冻干程序

　　产品的冷冻干燥需要在一定装置中进行,这个装置叫做真空冷冻干燥机,简称冻干机.

　　冻干机按系统分,由致冷系统、真空系统、加热系统、和控制系统四个主要部分组成.按结构分,由冻干箱或称干燥箱、冷凝器或称水汽凝集器、冷冻机、真空泵和阀门、电气控制元件等组成.图十三是冻干机组成示意图.

　　冻干箱是一个能够致冷到-40℃左右,能够加热到+50℃左右的高低温箱,也是一个能抽成真空的密闭容器.它是冻干机的主要部分,需要冻干的产品就放在箱内分层的金属板层上,对产品进行冷冻,并在真空下加温,使产品内的水份升华而干燥.

　　冷凝器同样是一个真空密闭容器,在它的内部有一个较大表面积的金属吸附面,吸附面的温度能降到-40℃以下,并且能恒定地维持这个低温.冷凝器的功用是把冻干箱内产品升华出来的水蒸气冻结吸附在其金属表面上.

　　冻干箱、冷凝器、真空管道和阀门,再加上真空泵,便构成冻干机的真空系统.真空系统要求没有漏气现象,真空泵是真空系统建立真空的重要部件.真空系统对于产品的迅速升华干燥是必不可少的.

　　致冷系统由冷冻机与冻干箱、冷凝器内部的管道等组成.冷冻机可以是互相独立的二套,也可以合用一套.冷冻机的功用是对冻干箱和冷凝器进行致冷,以产生和维持它们工作时所需要的低温,它有直接致冷和间接致冷二种方式.

　　加热系统对于不同的冻干机有不同的加热方式.有的是利用直接电加热法；有的则利用中间介质来进行加热,由一台泵使中间介质不断循环.加热系统的作用是对冻干箱内的产品进行加热,以使产品内的水份不断升华,并达到规定的残余水份要求.

　　控制系统由各种控制开关,指示调节仪表及一些自动装置等组成,它可以较为简单,也可以很复杂.一般自动化程度较高的冻干机则控制系统较为复杂.控制系统的功用是对冻干机进行手动或自动控制,操纵机器正常运转,以冻干出合乎要求的产品来.

　　冷冻干燥的程序是这样的:在冻干之前,把需要冻干的产品分装在合适的容器内,一般是玻瓶或安瓶,装量要均匀,蒸发表面尽量大而厚度尽量薄些；然后放入与冻干箱尺寸相适应的金属盘内.装箱之前,先将冻干箱进行空箱降温,然后将产品放入冻干箱内进行预冻,抽真空之前要根据冷凝器冷冻机的降温速度提前使冷凝器工作,抽真空时冷凝器应达到-40℃左右的温度,待真空度达到一定数值后(通常应达到100uHg以上的真空度),即可对箱内产品进行加热.一般加热分两步进行,步加温不使产品的温度超过共熔点的温度；待产品内水份基本干完后进行步加温,这时可迅速地使产品上升的规定的温度.在温度保持数小时后,即可结束冻干.

　　整个升华干燥的时间约12-24小时左右,与产品在每瓶内的装量,总装量,玻璃容器的形状、规格,产品的种类,冻干曲线及机器的性能等等有关.

　　冻干结束后,要放干燥无菌的空气进入干燥箱,然后尽快地进行加塞封口,以防重新吸收空气中的水份.

　　在冻干过程中,把产品和板层的温度、冷凝器温度和真空度对照时间划成曲线,叫做冻干曲线.一般以温度为纵坐标,时间为横坐标.冻干不同的产品采用不同的冻干曲线.同一产品使用不同的冻干曲线时,产品的质量也不相同,冻干曲线还与冻干机的性能有关.因此不同的产品,不同的冻干机应用不同的冻干曲线.图十四是冻干曲线示意图(其中没有冷凝器的温度曲线和真空度曲线).

第三节

共溶点及其测量方法

　　需要冻干的产品,一般是预先配制成水的溶液或悬浊液,因此它的冰点与水就不相同了,水在0℃时结冰,而海水却要在低于0℃的温度才结冰,因为海水也是多种物质的水溶液.实验指出溶液的冰点将低于溶媒的冰点.

　　另外,溶液的结冰过程与纯液体也不一样,纯液体如水在0℃时结冰,水的温度并不下降,直到全部水结冰之后温度才下降,这说明纯液体有一个固定的结冰点.而溶液却不一样,它不是在某一固定温度完全凝结成固体,而是在某一温度时,晶体开始析出,随着温度的下降,晶体的数量不断增加,直到,溶液才全部凝结.这样,溶液并不是在某一固定温度时凝结.而是在某一温度范围内凝结,当冷却时开始析出晶体的温度称为溶液的冰点.而溶液全部凝结的温度叫做溶液的凝固点.因为凝固点就是融化的开始点(既熔点),对于溶液来说也就是溶质和溶媒共同熔化的点.所以又叫做共熔点.可见溶液的冰点与共熔点是不相同的.共熔点才是溶液真正全部凝成固体的温度.

　　显然共熔点的概念对于冷冻干燥是重要的,因为冻干产品可能有盐类、糖类、明胶、蛋白质、血球、组织、病毒、细菌等等的物质.因此它是一个复杂的液体,它的冻结过程肯定也是一个复杂的过程,与溶液相似,也有一个真正全部凝结成固体的温度.即共熔点.由于冷冻干燥是在真空状态下进行.只有产品全部冻结后才能在真空下进行升华,否则有部分液体存在时,在真空下不仅会迅速蒸发,造成液体的浓缩使冻干产品的体积缩小；而且溶解在水中的气体在真空下会迅速冒出来,造成象液体沸腾的样子,使冻干产品鼓泡,甚至冒出瓶外.这是我们所不希望的.为此冻干产品在升华开始时必须要冷到共熔点以下的温度,使冻干产品真正全部冻结.

　　在冻结过程中,从外表的观察来确定产品是否完全冻结成固体是不可能的；靠测量温度也无法确定产品内部的结构状态.而随着产品结构发生变化时电性能的变化是极为有用的,特别是在冻结是电阻率的测量能使我们知道冻结是在进行还是已经完成了,全部冻结后电阻率将非常大,因此溶液是离子导电.冻结是离子将固定不能运动,因此电阻率明显增大.而有少量液体存在时电阻率将显著下降.因此测量产品的电阻率将能确定产品的共熔点.

　　正规的共熔点测量法是将一对白金电极浸入液体产品之中,并在产品中插一温度计,把它们冷却到-40℃以下的低温,然后将冻结产品慢慢升温.用惠斯顿电桥来测量其电阻,当发生电阻突然降低时,这时的温度即为产品的共熔点.电桥要用交流电供电,因为直流电会发生电解作用,整个过程由仪表记录.(图十六)

　　也可用简单的方法来测量,如图十五所示.用二根适当粗细而又互相绝缘的铜丝插入盛放产品的容器中,作为电极.在铜电极附近插入一支温度计,插入深度与电极差不多,把它们一起放入冻干箱内的观察窗孔附近,并用适当方法把它们固定好,然后与其他产品一起预冻,这时我们用万用表不断地测量在降温过程中的电阻数值,根据电阻数值的变化来确定共熔点.

　　把电极引线通过一个开关与万用表相连,可以不分正负极.如果冻干箱没有电线引出接头,则可以用二根细导线从箱门缝处引出,在电线附近涂些真空密封蜡,这样不致于影响真空度.

　　待温度计降至0℃之后即开始测量并作记录.把万用表的转换开关放在测量电阻的最(×1K或×10K).由于万用表内使用的是直流电,为了防止电解作用,在每次测量完之后要把开关立即关掉,把每一次测量的温度和电阻数值一一记录下来.开始时电阻值很小,以后逐步增高.到某一温度时电阻突然增大,几乎是无穷大,这时的温度值便是共熔点数值.

　　用这种方法测量的共熔点有一定的误差,因为铜电极处多少有些电解作用.万用表对于高阻值没有电桥灵敏；另外,冻结过程与熔化过程电阻的变化情况并不完全相同,但所测之值仍有实用参考价值.

　　共熔点的数值从0℃到40℃不等,与产品的品种、保护剂的种类和浓度有关.一些物质的共熔点列表二十二供参考,因实际的冻干产品还有其它成份.所以与此不相同.

第四节

产品的预冻

　　产品在进行冷冻干燥时,需要装入适宜的容器,然后进行预先冻结,才能进行升华干燥.预冻过程不仅昰为了保护物质的主要性能不变；而且要获得冻结后产品有合理的结构以利于水份的升华；还要有恰当的装量,以便日后的应用.

　　产品的分装通常有散装和瓶装二种方式.散装可以采用金属盘,饭盒或玻璃器皿；瓶装采用玻璃瓶和安瓿.玻璃瓶又有血浆瓶.疫苗瓶和青霉素小瓶等,安瓿也有平底安瓿、长安瓿和圆安瓿等；这些需根据产品的日后使用情况来决定,瓶子还需配上合适的胶塞.

　　各种容器在分装之前要求清洗干净并进行灭菌处理.

　　需要冻干的产品需配制成一定浓度的液体,为了能保证干燥后有一定的形状,物质含量在10~15%之间.

　　产品分装到容器有一定的表面积与厚度之比.表面积要大一些,厚度要小些.表面积大有利于升华,产品厚度大不利于升华.一般分装厚度不大于10mm.有些产品需用大瓶.并冻干较大量的产品时,可以采用旋冻的方法冻成壳状,或倾斜容器冻成斜面,以增大表面积,减小厚度.

　　产品的预冻方法有冻干箱内预冻法和箱外预冻法.

　　箱内预冻法是直接把产品放置在冻干机冻干箱内的多层搁板上,由冻干机的冷冻机来进行冷冻.大量的小瓶和安瓿进行冻干时为了进箱和出箱方便,一般把小瓶或安瓿分装在若干金属盘内,再装进箱子.为了改进热传递,有些金属盘制成可分离式,进箱时把底抽走,让小瓶直接与冻干箱的金属板接触；对于不可抽低的盘子要求盘底平整,以获得产品的均一性.采用旋冻法的大血浆瓶要事先冻好后加上导热用的金属架或块后再进行冷冻.

　　箱外预冻有二种方法.有些小型冻干机没有进行预冻产品的装置.只能利用低温冰箱或酒精加干冰来进行预冻.另一种是专用的旋冻器,它可把大瓶的产品边旋转边冷冻成壳状结构.然后再进入冻干箱内

　　还有一种特殊的离心式预冻法,离心式冻干机就采用此法.利用在真空下液体迅速蒸发,吸收本身的热量而冻结.旋转的离心力防止产品中的气体溢出,使产品能“平静地”冻结成一定的形状.

　　转速一般为800转/分左右.

　　冷冻对细胞和生命体产生一定的破坏作用,其机理是非常复杂的.目前尚无统一的理论,

　　但一般认为主要是由机械效应和溶质效应引起.

　　生物物质的冷冻过程首先是从纯水结冰开始,冰晶的生长逐步造成电解质的浓缩.随后是低共熔混合物凝固.全部变为固体.

　　机械效应是细胞内外冰晶生长而产生的机械力量引起的.特别是对于有细胞膜的生命体影像较大.一般冰晶越大,细胞膜越易破裂,从而造成细胞死亡；冰晶小,对细胞膜的机械损伤也较小.

　　缓慢冷冻产生的冰晶较大,快速冷冻产生的冰晶较小；就此而言.快速冷冻对细胞的影响较小.缓慢冷冻容易引起细胞的死亡.

　　溶质效应是由于水的冻结使间隙液体逐渐浓缩,从而使电解质的浓度增加,蛋白质对电解质是较敏感的.电解质浓度的增加引起蛋白质的变性,而使细胞死亡；另外电解质浓度的增加会使细胞脱水而死亡.间隙液体浓度越高.上述原因引起的破坏也越厉害.溶质效应在某一温度范围最为明显.这个温度范围在水的冰点和该液体的全部固化温度之间.若能以较高的速度越过这一温度范围,溶质效应所产生的效果就能大大减弱.

　　另外冷冻时所形成的晶体大小在很大程度上也影响干燥的速率和干燥后产品的溶解速度.大的冰晶容易升华,小的冰晶不利于升华；但大的冰晶溶解慢,小的冰晶溶解快.冰晶越小、干燥后越能反映产品的原来结构.

　　综上所述,需要有一的冷却速率.以得到的细胞存活率,的产品物理性状和溶解速度.当然提高存活率与在产品中加入抗低温剂(保护剂之一)还有很大的关系.列如甘油、二甲亚砜、糖类等.这些抗低温物质能帮助产品扩冷却速率的范围,以便使更多的细胞存活下来.

　　为了获的不同的降温速度.就要采取不同的预冻方法；列如有时需装箱之后才开始冻干箱的降温,有时需让机器预先降到低温,再将产品装入冻干箱内.

　　预冻的目的也是为了固定产品,以便在真空下进行升华.如果没有冻实.则抽真空时产品会冒出瓶外来,没有一定的形状；如果冷的过低,则不仅浪费了能源和时间,而且对某些产品还会降低存活率.

　　因此预冻之前应确定三个数据.其一是预冻的速率,应根据产品不同而试验出一个冷冻速率.其二是预冻温度,应根据改产品的共熔点来决定,预冻的温度应低于共熔点的温度.其三是预冻的时间,根据机器的情况来决定,保证抽真空之前所有产品均已冻实.不致因抽真空而冒出瓶外,冻干箱的每一板层之间,每一板层的各部分之间温差越小,则预冻的时间可以相应缩短,一般产品的温度达到预冻温度之后1－2小时即可开始抽真空

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