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操作步骤 1. 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。 2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL； 3. 待测样本孔先加生物素10μL，再加待测样本50μL； 4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。 5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5 次（也可用洗板机洗板）。 6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入终止液50μL，15min 内，在450nm 波长处测定各孔的OD 值。

洗板方法 1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5 次。 2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。 结果判断 绘制标准曲线：在Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

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