猪蓝耳IgG抗体(PRRSV-IgG)ELISA试剂盒

猪蓝耳IgG抗体(PRRSV-IgG)ELISA试剂盒操作宝典：

1. 抗原固定（包埋）：将对应疫苗用0.05M的碳酸钠（Na2CO3）溶液稀释至2 微克/毫升， 在96孔ELISA薄板上每孔加100µL， 于37度2小时或4度冰箱过夜。第二天

2. 封闭（BLOCKING）：用PBSt冲洗薄板三次，每次必须把孔中液体拍掉. 再在每孔加1%脱指奶粉或BSA或0.1%吐温（用PBSt稀释）100µL，37度下放置30分钟.

3. 用PBSt冲洗薄板3次，拍干孔中液体。

4. 猪蓝耳IgG抗体(PRRSV-IgG)ELISA试剂盒滴度测试，每个样本用8孔测试。

（1）如样本为血清，则每孔加上100µL含5µg/mL抑制疫苗（用0.1%BSA的PBSt液稀释），抑制疫苗为偶联物和要检测抗体的疫苗的偶联物一样的另一种疫苗。

（2）如样本为已纯化的抗体，则不用加抑制疫苗。

5. （1）血清样本用含5µg/mL抑制疫苗溶液（用0.1%BSA的PBSt液稀释）稀释400倍.在第一孔加100µL（总量为200µL/孔），混匀后移液100µL到第二孔，同样混匀后从第二孔移液100µL到第三孔•••••如此直至第7孔，留第八孔为空白对照。这样从1-7孔的最终样本稀释度分别为：1：800，1：1600，1：3200， 1：6400， 1： 12800， 1： 25600， 1： 51200。（2）抗体样本则稀释1000倍，混匀后移液50µL到第二孔.....至第七孔，留第八孔为空白对照。

6. 稀释完后在37度反应60分钟.

7. 吸掉每孔中的液体，用PBSt分别清洗4次，每次拍干孔内液体.

8. 上二抗：将抗兔IgG HRP用PBSt稀释，稀释倍数（1：5000-1：20000不等）由其浓度决定，每孔加100µL，37度反应30分钟后重复清洗步奏4次。

9. 拍干后每孔加入100µL的过氧化物酶（HRP）底物TMB生色. 37度大概15-30分钟每孔加100µL2M硫终止反应，然后在酶联测试仪于波长450纳米读数.

10. 猪蓝耳IgG抗体(PRRSV-IgG)ELISA试剂盒结果判断、记录：计算OD为50%时，血清（或抗体）的最大稀释度，以最大稀释度为样品的滴度，记录滴度，并将实验结果报告相关人员。

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