豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA Kit

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福建省厦门市

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  • 豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA Kit实验原理

    用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

    豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA Kit操作步骤

    实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。

    1.         加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。

    为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

    2.         弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37,60分钟。

    3.         温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。

    4.         每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl37℃,60分钟。

    5.         温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。

    6.         依序每孔加底物溶液90μl37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

    7.         依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

    8.         用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

    注:

    1. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。

    2. 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。

    3. 为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。

    4. 未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。

    5. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。

    洗板方法手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

    计算

    以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

    豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA Kit注意事项

    1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。

    2. 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。

    3. 一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用加样。

    4. 请每次测定的同时做标准曲线,建议做复孔。

    5. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。

    6. 在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。

    7. 底物请避光保存。

    8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

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    级别 : 超纯、高纯
    用途类别 : 检测试剂
    含量 : 99%
    品牌 : 慧嘉生物
    用途范围 : 仅用于科研实验用
    产品规格 : 48/96
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