酪朊酸,TAMRA标记

产品参数

Ex (nm)	552	Em (nm)	578
分子量	N/A	溶剂	Water
存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照

简要概述

        酪朊酸,TAMRA标记是美国AAT Bioquest生产的荧光染料，由于这种本身就具有荧光特征的酪蛋白可以被许多蛋白酶水解，因此它们广泛地用于荧光测定法检测蛋白酶活性的试验中。作为一个完整的底物，酪蛋白上带着TAMRA标签，具有显著的荧光淬灭效果。具有显著的荧光淬灭效果。经过蛋白酶催化水解，释放其淬灭效果，产生明亮的绿色荧光染料所标记的短肽；这种荧光强度的增加与蛋白酶的活性成直接的比例关系。与FITC标记的酪蛋白相比，这种酪蛋白底物产生荧光不依赖于pH，这种特性使其能够更方便地用于需要在低pH条件进行的荧光分析。我们不推荐将这种偶联物用于荧光偏振分析。在荧光偏振分析中我们可以使用常规的荧光素标记的酪蛋白偶联物。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的酪朊酸,TAMRA标记。 

产品说明书

样品实验方案 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。酪蛋白，TAMRA共轭原液：在PBS缓冲液中制成5-10 mg / mL酪蛋白，TAMRA偶联的原液。 注意：未使用的储备溶液可分为一次性使用的等分试样，并在-20 oC下保存，并避免暴露在光线下。

2.工作溶液

酪蛋白TAMRA共轭的工作溶液（2X）：将TAMRA共轭的原液以100-400μg/ mL的浓度稀释至50-100 mM Tris缓冲液（pH 7.4）中。 2X Assay工作溶液设计用于检测胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白细胞弹性蛋白酶的活性。 对于其他蛋白酶，请参考表1中合适的测定缓冲液配方。 对于每种蛋白酶，应通过实验确定测定工作溶液的浓度。

样品操作及分析

1.将等体积的胰蛋白酶标准品或样品与2X Assay工作溶液混合。

2.在Ex / Em = 490/525 nm处监控荧光的增加。

2.1 对于动力学读数：立即开始连续连续测量荧光强度，并每5分钟记录一次数据，持续30分钟。

2.2 对于终点读数：在避光的条件下，将反应在所需温度下孵育30至60分钟。 然后测量荧光强度。

表1.测定工作溶液的适当测定缓冲液配方

蛋白酶	1x 检测缓冲液
组织蛋白酶D	20 mM柠檬酸钠，pH 3.0
木瓜蛋白酶	20 mM乙酸钠，20 mM半胱氨酸，2 mM EDTA，pH 6.5
PAE	20 mM磷酸钠，pH 8.0
胃蛋白酶	10 mM HCl，pH 2.0
猪胰弹性蛋白酶	10 mM Tris-HCl，pH 8.8
枯草杆菌	20 mM磷酸钾缓冲液，pH 7.6，150 mM NaCl

参考文献

Liquid temperature measurement method in microchannels by using fluorescence polarizationAuthors: Kazuya Tatsumi, Chi Hsuan Hsu, Atsushi Suzuki, Kazuyoshi NakabeJournal: Heat and Mass Transfer (2017): 1--10

Micro-scale temperature measurement method using fluorescence polarizationAuthors: K Tatsumi, CH Hsu, A Suzuki, K NakabeJournal: (2016): 032097

Microscopic Fluid Temperature Measurements Using Fluorescence Polarization MethodAuthors: Kazuya Tatsumi, Akihisa Tozaki, Kazuyoshi NakabeJournal: (2011): T10167--T10167

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