iFluor 488 酪胺(iFluor 488 Tyramide)货号45100应用范围该产品适合标记抗体或蛋白，也可应用于细胞或组织。iFluor 488 酪胺(iFluor 488 Tyramide)货号45100优势1.增强荧光信号；2.提高检测灵敏度；iFluor 488 酪胺(iFluor 488 Tyramide)货号45100适用仪器荧光显微镜

Ex:	FITC滤波片组
Em：	FITC滤波片组
推荐孔板:	黑色透明底板
滤波片：	FITC滤波片组

iFluor 488 酪胺(iFluor 488 Tyramide)货号45100概述iFluor 488 酪胺（iFluor 488 Tyramide），是一种用于荧光信号放大的产品，它通过HRP和过氧化氢催化，标记到抗体上。

iFluor 488 酪胺(iFluor 488 Tyramide)货号45100实验方案

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织

2. 在封闭缓冲液中添加一抗

3. 加入结合HRP的二抗

4. 准备酪胺工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

溶液配制

储备溶液配制

酪胺储备溶液（200X）：将100 µL DMSO加入小瓶中并充分混合。注意：未使用的酪胺储备溶液可在2-8℃下储存。

工作溶液配制

酪胺工作溶液（1X）：将100 µL酪胺储备溶液添加到20 mL含有0.003％H₂O₂的缓冲液中。 注意：可以使用pH = 7.4的Tris Buffer以获得性能。注意：应立即使用Tyramide工作溶液，随用随配。注意： 20 mL溶液适合200次测试。

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

酪胺标记

1.准备并向每个样品中加入100 µL的Tyramide工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果观察到非特异性信号，则可以缩短与Tyramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育时间。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪胺。

2.用PBS冲洗3次。

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Tyramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号	产品名称	Ex/Em(nm)
17548	核蓝 DCS1	350/461
17550	核绿 DCS1	503/526
17551	核橙 DCS1	528/576
17552	核红 DCS1	642/660

 

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