仑昌硕生物 小鼠鞘磷脂（SM）elisa试剂盒

仑昌硕生物    小鼠鞘磷脂（SM）elisa试剂盒

         本试剂盒仅供研究使用.检测范围: 96T0.1ng/ml - 4ng/ml使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中免疫球蛋白M(IgM)含量.实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠免疫球蛋白M(IgM)水平.用纯化的小鼠免疫球蛋白M(IgM)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白M(IgM),再与HRP 标记的免疫球蛋白M(IgM)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色.TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成的黄色.颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白M(IgM)呈正相关.用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中小鼠免疫球蛋白M(IgM)浓度.试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品(8ng/ml) 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验.若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性.操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释.

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                 目的建立能够分泌特异性抗小鼠 膜联蛋白A2(AnxA2)的大鼠-小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系.方法利用重组小鼠AnxA2蛋白作为抗原免疫Wistar大鼠,通过细胞融合和杂交 瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠AnxA2蛋白的大鼠-小鼠融合单抗杂交瘤细胞株.采用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹和流式细胞术验证所筛 选的单克隆抗体的特异性.结果通过对30多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠AnxA2的大鼠-小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系 SZ-158,连续培养传代后染色体分析证实,Wistar大鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞稳定融合;免疫印迹和流式细胞术显示该单克隆抗体可以特异识别 小鼠AnxA2重组蛋白.结论该研究所获得的大鼠-小鼠融合单克隆抗体特异性针对小鼠AnxA2蛋白,可用于AnxA2转基因小鼠中AnxA2表达的检 测,为深入研究AnxA2的功能提供了物质保障.

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    背景研究已证实,缺氧是诱导视网膜新生血管形成的主要因素,与多种眼科病变的发生有关,且低氧与视网膜神经节细胞(RGCs)的变性也密切关联,但对视网膜神经组织病变的研究较少.目的观察低氧对RGCs中ANXA2表达的影响,探讨低氧对RGCs的损伤机制.方法用含体积分数10%胎牛血清的高糖培养液对小鼠RGC-5细胞株进行培养,采用免疫荧光技术检测RGCs特异表面抗原Thy-1的表达.分别采用含CoCl2终质量浓度为50,100,200,300μmol/L的培养液培养RGC-5细胞,并分别于培养后12,24,48h采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞吸光度(A)值,以不含CoCl2培养液培养RGC-5细胞作为正常对照.以含终浓度为100μmol/LCoCl2培养液培养RGC-5细胞以建立低氧细胞模型,将模型细胞分为低氧3h组,低氧6h组,低氧12h组,低氧24h组,正常培养的细胞作为正常对照组.各组细胞行Hoeehst 33342荧光染色,观察RGC-5细胞核形态的变化;采用实时定量逆转录PCR检测各组细胞中ANXA2 mRNA的相对表达量;采用Western blot法检测细胞中ANXA2蛋白的相对表达量;采用免疫荧光法观察ANXA2在细胞中表达的分布.结果体外培养的RGC-5细胞呈梭形或多边形,Thy-1反应阳性.与正常对照组比较,50和100μmol/LCoCl2组各时间点细胞A值的差异均无统计学意义(均P〉0.05);

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