小鼠125二羟基维生素D试剂盒 125OH2VDelisa试剂盒 仑昌硕生物

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       [背景]热应激(HS)可导致机体重要脏器损伤甚至引起死亡,全身性炎症反应是其主要原因之一.NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体在介导组织损伤引起的无菌性炎症中起重要作用,但其在HS损伤中的作用及机制尚不清楚.[目的]探讨NLRP3炎症小体在HS小鼠系统性炎症反应和多器官损伤中的作用.[方法]设立野生型C57BL/6雄性小鼠对照组,HS组,以及NLRP3敲除HS组(Nlrp3-/-HS组),每组8只.利用温度(41.0±0.5)℃,湿度(65±5)%的高温环境模拟舱对HS组和Nlrp3-/-HS组小鼠进行HS.每隔15～20 min监测肛温以及记录一般精神身体状况.当HS组小鼠肛温均超过42.0℃,立即将两组小鼠移至正常室温环境,于室温恢复4h,解剖三组小鼠.HE染色观察小鼠肝,,脑和肠组织的病理改变;采用ELISA试剂盒检测各组的血清肿瘤坏死因子α (TNF-α),白细胞介素(IL)-1β和IL-6的水平;采用内毒素检测试剂盒检测血清内毒素水平;采用免疫印记法检测肠闭锁蛋白(Occludin),闭锁小带蛋白-1(ZO-1)的表达水平,以及脑,和肠道组织NLRP3,半胱天冬酶(caspase)-1,IL-1β的蛋白表达水平.[结果]受热90 min时,HS组小鼠的肛温[(42.1±0.2)℃]高于对照组[(36.6±0.2)℃],Nlrp3-/-HS组小鼠肛温[(40.1±0.7)℃]和体重减轻量[(1.3±0.2)g]低于HS组(P<0.05).HE染色显示HS组小鼠的肝,脾,脑和肠组织有不同程度的损伤,而Nlrp3-/-HS组小鼠的各个组织病理损伤程度减轻.与对照组相比,HS组小鼠血清的TNF-α,IL-1β和内毒素水平均升高,肠道Occludin,ZO-1表达量降低,Nlrp3-/-HS组小鼠的IL-1β分泌量较HS组减少,肠道Occludin,ZO-1表达量增多(P<0.05);HS组小鼠脑,肠道组织的NLRP3,caspase-1,IL-1β蛋白水平与对照组相比升高(P<0.05), Nlrp3-/-HS组小鼠的NLRP3,caspase-1和IL-1β表达量较HS组降低(P<0.05).[结论]NLRP3炎症小体活化参与了急性HS所致的系统性炎症反应以及多器官功能损伤.

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   目的:建立热应激下评价NLRP3炎症小体活性的细胞模型与动物模型.方法:(一)细胞实验.(1)确定热应激激活NLRP3炎症小体实验条件为40℃,4 h.在此基础上,建立热应激下评价NLRP3炎症小体活性的细胞模型.实验分为四组:空白对照组,热应激组,LPS组,LPS+热应激组.各组给予相应处理后,收集细胞培养液上清,ELISA法测定炎症因子IL-1β的浓度.提取各组细胞总蛋白,Western Blot法检测NLRP3炎症小体相关蛋白的表达变化,包括NLRP3,pro-Caspase-1,ASC,p10和pro-IL-1β.(2)提取各组细胞total RNA,Real-Time PCR检测NLRP3炎症小体相关组分基因NLRP3,ASC,Caspase-1的表达变化.(二)动物实验.(1)C57BL/6小鼠分为正常对照组,热应激组,LPS组,LPS+热应激组.热应激组小鼠放入40℃高温模拟仓(湿度60%±5%)中给予热应激,LPS组小鼠腹腔注射LPS,LPS+热应激组小鼠腹腔注射LPS 4 h后放入40℃高温模拟仓(湿度60%±5%)中给予热应激.以LPS+热应激组小鼠濒死时间为终止时间,然后取血制备血清,ELISA法测定IL-1β的含量.(2)同时取上述各组实验动物的脑组织,提取各组脑组织总蛋白,Western Blot法检测NLpro-IL-1β蛋白的表达(3)生存分析表明LPS+热应激组动物生存时间较其它三组显著降低(P0.05).结论:经LPS预处理后,热应激可以激活小鼠原代腹腔巨噬细胞的NLRP3炎症小体,促进NLRP3,pro-Caspase-1,ASC,p10和pro-IL-1β蛋白的表达,以及IL-1β的分泌;NLRP3,ASC和Caspase-1基因表达水平的上调.小鼠接受40℃热应激后,血清IL-1β水平升高,脑组织中NLRP3,pro-Caspase-1和pro-IL-1β蛋白的表达上调.以上结果表明,LPS+热应激在细胞水平和整体动物水平均可激活NLRP3炎症小体.

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    研究背景与目的:心搏骤停是的临床急危重症之一,心肺脑复苏作为其有效的救治手段,一直在不断的改进,但心搏骤停患者的预后并未得到显著的改善.心搏骤停心肺复苏后的幸存者普遍存在不同程度的神经功能障碍.众所周知,炎症反应在脑缺血/再灌注损伤过程中扮演着至关重要的角色.然而,心搏骤停心肺复苏后全身缺血/再灌注损伤过程中,脑缺血/再灌注损伤所致的炎症反应机制尚不明确.细胞焦亡作为一种程序性死亡方式,已成为近年来研究的热点.本研究旨在探讨NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡在心搏骤停心肺复苏后脑缺血/再灌注损伤过程中的作用及相关机制.方法:1.采用C57BL/6小鼠和NLRP3~(-/-)小鼠制备高钾合并窒息心搏骤停心肺复苏模型,根据复苏后取材时间点的不同,将这两种品系的小鼠分别分为复苏前组,复苏后2h组,复苏后12h组和复苏后24h组.评估这两种小鼠的总体复苏情况,并记录各组小鼠的神经功能评分.通过免疫印迹法(Western blot,WB)检测脑组织中NLRP3,炎性Caspase-1,细胞焦亡的执行蛋白GSDMD的表达.应用免疫荧光观察复苏后不同时间点海马回区NLRP3和活,改善细胞形态,增强细胞贴壁能力和细胞活力,降低炎性因子水平,继而显著提高小鼠心肺复苏后2h存活率,自主循环恢复率,自主呼吸恢复率,显著缩短心肺复苏后自主循环恢复时间和自主呼吸恢复时间,显著改善小鼠心肺复苏后的神经功能评分

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