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山东省济宁市
液相色谱仪根据固定相是液体或是固体,又分为液-液色谱(LLC)及液-固色谱(LSC)。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较,具有高效、快速、灵敏等特点。其主要操作步骤、原理,注意事项如下。
液相色谱仪根据固定相是液体或是固体,又分为液-液色谱(LLC)及液-固色谱(LSC)。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较,具有高效、快速、灵敏等特点。其主要操作步骤、原理,注意事项如下。
一、 水相中的溶质溶解方式
水相中需溶解的无机盐和表面活性剂等固体溶质,建议采用加热法,不建议采用振摇、超声等方式。因此种方式的溶解,溶质可能处于“临界胶团浓度”,其后一旦遇到某特殊情形(如遇有机溶剂、温度剧降等),极易析出少量结晶;而一旦析出,便将损伤仪器和色谱柱
二、 流动相的配制与使用 1. 恒度洗脱
一定是将水相与有机相混合后、抽滤(使用混合型过滤膜),用一个管路(如A管)泵入仪器,这是使用的原则。切勿因节约有机相、便于摸索色谱条件等原因而使用两个管路(一个纯水相、一个纯有机相)泵入仪器,即便配制了脱气机。因此种情形极易造成水相中盐和表面活性剂的少量析出。 剩余流动相完全可继续使用,密封后放置阴凉处;待下次试验时与新配制的流动相混合后抽滤即可。无需担心发霉、无机盐析出、挥发、比例不准等问题,这些皆为疑神疑鬼的表现。实践是检验真理的标准!实践吧~ 2. 梯度洗脱
流动相配制较为科学的方式是:A相为高比例的水相-低比例的有机相、B相为低比例的水相-高比例的有机相(英国药典几乎均如此);其次为:A相为高比例的水相-低比例的有机相、B相为纯有机相;最不科学的为:A相为纯水相、B相为纯有机相,如既有质量标准采用了此种方式,建议改为第二种或第一种方式,否则基线漂移严重,难以进行稳定的杂质检测。
梯度洗脱结束后,建议经5分钟回到初始状态,再平衡5分钟后开始下一针测定。这10分钟的稳定极为关键。切勿短时间内回到初始状态,会对仪器和色谱柱损伤较大。
三、 色谱柱的安装
标准SOP应为:
取A管路放入流动相瓶中→拧松泵头→流速由0ml/min逐渐升至10ml/min,观察尾液是否呈瀑布状流出,持续10秒→拧紧泵头→流动相呈抛射状从安装色谱柱的一端喷出,观测是否呈抛物线状,持续5秒→流速逐步降至1.0ml/min →安装色谱柱,待20秒后,流动相从色谱柱另一端呈泉水状涌出再安装另一端→手握两端螺丝帽,拧紧。
以上安装顺序遵循的是:
逐级排放气泡和仪器内存留的洗液,使得安装后气泡极难混入。本人曾试验梯度洗脱连续一周,第一针与最后一针主成分保留时间相差在6秒以内。
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加工定制 : | 否 |
品牌 : | SHIMADZU/岛津 |
型号 : | 液相色谱仪 |
类型 : | 高压液相色谱 |
测量范围 : | 190-700mm |
测量对象 : | 标准 |
控温范围 : | 10-89℃ |
尺寸 : | 650mm |
重量 : | 32kg |
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