Amplite 荧光 ssDNA 定量试剂盒 *针对微孔板酶标仪进行了优化*

货号	17623	存储条件	Multiple
规格	200 Tests
Ex (nm)	498	Em (nm)	519
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光 ssDNA 定量试剂盒以简单准确的方式来检测单链 DNA。该试剂盒包含所有基本试剂，包括 Helixyte Green ssDNA 试剂、稀释缓冲液和预稀释的 DNA 标准品。 Helixyte Green ssDNA 试剂是一种灵敏的荧光核酸探针，用于定量溶液中的寡核苷酸和单链 DNA (ssDNA)。它使科研人员能够量化低至 100 pg/mL 的寡核苷酸或 ssDNA。这种灵敏度超过吸光度方法的 10,000 倍以上。使用该试剂盒，可检测低至 1 ng/mL 的寡核苷酸或 ssDNA。使用该试剂盒对一些 ssDNA 进行了定量，包括具有相似灵敏度的 M13 和 φX174 病毒 DNA 以及变性小牛胸腺 DNA。它们的检测限不受核酸制剂中常见污染物的明显干扰，包括盐类、尿素、乙醇、氯仿、去污剂、蛋白质、ATP、核苷酸和六碱基短寡核苷酸等。然而，双链 DNA (dsDNA) 和 RNA 确实会干扰检测，因为 Helixyte Green ssDNA 试剂会与 dsDNA 和 RNA 结合以产生荧光信号。 Amplite 荧光 ssDNA 定量试剂盒经过优化，可使用荧光酶标仪定量 dsDNA。

 

适用仪器

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荧光酶标仪
激发：	490nm
发射：	525nm
Cutoff：	515nm

产品说明书

实验方案

概述

1.添加 100 µL ssDNA 标准品或测试样品2.添加 100 µL Helixyte Green ssDNA 工作溶液3.在室温下孵育 5-10 分钟4.检测 Ex/Em=490/525 nm 处的荧光强度

注：以下方案是使用 Helixyte Green ssDNA 定量总核酸含量的示例。 打开前让所有成分升温至室温。 目前没有发现关于 Helixyte Green ssDNA 染色剂的致突变性或毒性的数据。 由于该试剂与核酸结合，因此应将其视为潜在的诱变剂并小心处理。 应特别小心处理 DMSO 原液，因为已知 DMSO 可促进有机分子进入组织。

 

溶液制备

ssDNA 标准溶液将 10 uL 100 ug/mL ssDNA 标准溶液（组分 C）添加到 190 uL 检测缓冲液（组分 B）中以获得 5 ug/mL 标准溶液，然后进行 1:3 稀释以获得连续稀释的 ssDNA 标准溶液（SS2- SS7）。请使用AAT Bioquest连续稀释计算器以方便数据处理。

 

Helixyte Green ssDNA 工作溶液

将 100 μL Helixyte Green ssDNA（组分 A）加入 10 mL 检测缓冲液（组分 B）中，制备 Helixyte Green ssDNA 工作溶液。 通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。注意：建议在塑料容器而不是玻璃容器中制备工作溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。为获得效果，该溶液应在稀释后几小时内使用。注意：10 mL 的工作溶液对于一个 96 孔板就足够了。

 

操作步骤

表 1. 纯黑色 96 孔板中 ssDNA 标准品和测试样品的布局。 SS= ssDNA 标准品（SS1 - SS7，1667 至 2.3 ng/mL）； BL=空白控制； TS=测试样品

 

BL	BL	TS	TS
SS1	SS1	...	...
SS2	SS2	...	...
SS3	SS3
SS4	SS4
SS5	SS5
SS6	SS6
SS7	SS7

 

表2.各孔试剂组成

孔	体积	试剂
SS1-SS7	100ul	连续稀释（1667 至 2.3 ng/mL）
BL	100ul	缓冲液
TS	100ul	样品

 

1.根据表 1和表 2 中提供的布局准备 ssDNA 标准 (NS)、空白对照 (BL) 和测试样品 (TS)。对于 384 孔板，每孔使用 25 μL 试剂，而不是 100 μL。2.将 100 µL Helixyte Green ssDNA 工作溶液加入 ssDNA 标准品、空白对照和测试样品的每个孔中，使测定体积为 200 µL/孔。 对于 384 孔板，将 25 µL 的 Helixyte Green ssDNA 工作溶液添加到每个孔中，以获得 50 µL/孔的总体积。3.在室温下孵育反应 5 到 10 分钟，避光。4.使用 Ex/Em = 490/525 nm（Cutoff在 515 nm 处）的荧光酶标仪检测荧光增加。

 

图示

图 1. ssDNA 剂量反应是在 96 孔黑色孔板中使用 Amplite Fluorimetric ssDNA 定量试剂盒测量的。

 

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