JC-10的分析方案

概述

准备含有测试化合物的细胞

添加JC-10工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）

在室温或37 ℃孵育1小时

在Ex读取荧光强度 / Em = 490 / 525nm和540 / 590nm

注意：以下是我们推荐的活细胞方案。 该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

操作步骤

1.准备JC-10工作溶液：

1.1每瓶DMSO原液（100μL，2 mg / mL，3 mM）只能使用一次。任何未使用的小瓶应储存在<-20℃。注意：避免反复冻融循环，并避光.

1.2准备1X JC-10工作溶液：在实验当天，解冻一份JC-10 stockolution到室温。在Hanks和20 mM Hepesbuffer（HHBS）或您选择的缓冲液（pH 7-8，含0.02％Pluronic [表情] F-127）中制备10至30μM1X工作溶液。通过votexing将它们混合均匀。注意：对于某些细胞系，pH值为8的工作溶液可能会阻止JC-10泄漏。

2.用荧光酶标仪进行JC-10检测：

2.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。 对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。

2.2将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板的JC-10工作溶液（来自步骤1.2）加入到细胞板中。

2.3将JC-10加载板在37 oC，5％CO2培养箱中孵育15-60分钟。

注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

2.4监测Ex / Em = 490/525 nm（FITC通道）和540/590 nm（TRITC通道）的荧光变化，进行比率分析。

可选：从板上取下JC-10工作溶液; 在分析之前，将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到细胞板中。

3.用荧光显微镜或流式细胞仪进行JC-10检测：

3.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。

3.2离心细胞，每管取1-5×105个细胞。

3.3将细胞重悬于500μLJC-10工作溶液中（来自步骤1.2）。

3.4在室温或37°C，5％CO2培养箱中孵育10至30分钟，避光。

注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

3.5使用荧光显微镜（使用FITC和TRITC过滤器）或流式细胞仪（使用FL1和FL2通道）监测Ex / Em = 490/525 nm和540/590 nm处的荧光变化。可选：移除JC-10工作 从板上解决; 在荧光显微镜下分析之前，将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到细胞板中。